備注:
a)檢材提取室/解剖室應(yīng)定期制備控制樣品,確保環(huán)境中無硅藻污染源;
b)控制樣品制備、檢材提取所使用的實驗耗材(5.1.2)均為一次性使用,避免交叉污染;
1 器官組織的取樣
1.1 肝臟的取樣
a)準備好一次性塑膠手套、一次性手術(shù)刀、一次性鑷子、一次性解剖墊袋等工具;切除肝臟表面組織;
b)換手術(shù)刀、鑷子,切取約10g深部組織,分三次取完,每次稱重約3g,分別放置塑料試管中;
c)填寫硅藻檢驗實驗室檢材信息表留檔。
1.2 腎臟的取樣
a)準備好一次性塑膠手套、一次性手術(shù)刀、一次性鑷子、一次性解剖墊袋等工具;沿腎外緣縱向切開包膜,剝離;
b)換手術(shù)刀,切取約10g深部組織,分三次取完,每次稱重約3g,分別放置塑料試管中;
c)填寫硅藻檢驗實驗室提取信息表留檔。
1.3 肺臟的取樣
a)準備好一次性塑膠手套、一次性手術(shù)刀、一次性鑷子、一次性解剖墊袋等工具;切除肺表面組織;
b)換手術(shù)刀,切取約1.5g深部組織,放置塑料試管中;
c)填寫硅藻檢驗實驗室檢材信息表留檔。
1.4 骨髓的取樣
a)刮凈骨骼上的軟組織和骨膜;
b)用純水沖洗骨骼3次;
c)鋸開骨干,用手術(shù)刀去除與鋸片接觸的骨髓組織;
d)用刮匙刮取全部骨髓組織,置塑料盒(或塑料袋、塑料試管)中;
e)取約10g骨髓組織,分三次取完,每次稱重約3g,分別置塑料試管中;
f)填寫硅藻檢驗實驗室提取信息表留檔。
1.5 水樣的取樣
a) 將水樣搖勻,取10mL~100mL水樣置塑料試管中。
2、硅藻提取-微波消解
2.1 器官組織的消解
a)分別將取樣的檢材(肝、肺、腎等)放入單獨的100ml微波消解罐內(nèi),同時各自添加硝酸8ml,30%過氧化氫溶液2ml。密封好微波消解罐放入反應(yīng)轉(zhuǎn)子罐架。(建議選擇肺對應(yīng)的消解罐作為主反應(yīng)罐)
b)用兩只手端起已組裝好的反應(yīng)轉(zhuǎn)子,使轉(zhuǎn)子上板上的箭頭指向正前方,使轉(zhuǎn)子底板下的萬向腳輪擱在爐腔上。
c)將反應(yīng)轉(zhuǎn)子向里推到底后稍微轉(zhuǎn)動一下,轉(zhuǎn)子會自動落在轉(zhuǎn)軸上。
d)將壓力傳感器和溫度探針的電纜插頭分別插入爐腔頂上溫壓連接器的插座內(nèi),分別捏住溫壓插頭的尾端,使插頭上紅點對準插座上的紅點,保持垂直方向插入插座,并聽到有輕微的“咔嗒”聲。
e)選擇固有微波消解程序“0”,按“”:運行鍵
待程序運行結(jié)束,主機發(fā)出提示音后進入冷卻程序,此時冷卻風(fēng)機啟動。當(dāng)溫度下降到100℃時,主機會發(fā)出鳴叫聲,此時表示冷卻結(jié)束。然后取出轉(zhuǎn)子。
2.2 水樣的消解
按水樣與硝酸體積比5:1的比例加入硝酸后置電熱板上在80℃~90℃條件下加熱30min。
3、硅藻提取-真空抽濾(光鏡版本)
3.1光鏡檢驗濾膜樣品的制備
按消解液與純水體積比1:5的比例加純水至消解罐,稀釋消解液;
將稀釋后同一檢材的消解液合并倒入同一抽濾杯(水系膜)中抽濾;
加50mL純水繼續(xù)抽濾,使濾膜表面接近中性;
取出濾膜,在電熱板上烘干。
4、顯微鏡觀察(光鏡版本)
4.1 濾膜透明化處理
取載玻片,在中心滴加2滴~3滴透明化試劑(乙酸-丁香酚混合試劑);
將濾膜置于透明化試劑上;
在濾膜上滴加1滴~2滴透明化試劑,加蓋蓋玻片。
4.2 光鏡檢驗
采用光學(xué)顯微鏡觀察經(jīng)上述1.1制備的玻片,方法如下:
根據(jù)硅藻個體大小采用不同的放大倍數(shù)觀察、拍照;